320国道起点为上海，终点为云南瑞丽姐告口岸，全程3695千米。它经过多个省市，具体经过地点如下。在上海，经过闵行、松江等区域。进入浙江后，途经嘉兴、杭州、富阳、桐庐、建德、衢州等地。进入江西，经过玉山、上饶、弋阳、鹰潭、余江、东乡、进贤、南昌、高安、上高、万载、宜春、芦溪、萍乡等地。在湖南，经过醴陵、株洲、湘潭、湘乡、娄底、涟源、新化、溆浦、怀化、芷江、新晃等地。进入贵州，经过玉屏、岑巩、三穗、镇远、施秉、黄平、凯里、麻江、都匀、独山等地。在云南，经过富宁、砚山、文山、蒙自、开远、建水、通海、玉溪、峨山、元江、墨江、普洱、景洪、勐海、瑞丽等地。