流动相与固定相均为液体，且两者互不相溶，以保证溶质能够在两相之间进行有效的分配。高效液相色谱的基本原理是溶质在固定相（cs）和流动相（cm）之间的分配平衡，该平衡遵循如下公式：\[K=\frac{cs}{cm}=\frac{Vs}{Vm}\]其中，K是分配系数，Vs是固定相的体积，Vm是流动相的体积。在高效液相色谱中，组分的保留顺序主要取决于K值，K值大的组分保留时间长。与气相色谱（GPC）相比，高效液相色谱（HPLC）在流动相对K值的影响上更为显著。高效液相色谱，亦称高压液相色谱、高速液相色谱、高分离度液相色谱或近代柱色谱，是色谱技术的一个重要分支。该技术采用高压输液系统，以不同极性的单一溶剂或混合溶剂、缓冲液等作为流动相，通过色谱柱中的固定相进行分离，随后进入检测器进行检测，实现对样品成分的分析。高效液相色谱法在化学、医学、工业、农学、商检和法检等多个学科领域发挥着至关重要的作用。根据固定相的性质，高效液相色谱可以分为多种类型，包括高效凝胶色谱、疏水性高效液相色谱、反相高效液相色谱、高效离子交换液相色谱、高效亲和液相色谱以及高效聚焦液相色谱等。不同类型的高效液相色谱用于分离或分析化合物的原理与相应的普通液相层析原理相似，但高效液相色谱具有更高的灵敏度、速度、分辨率和重复性，并且必须在色谱仪中进行。