样品前处理和初始洗脱之后，可以开始逐渐增加洗脱缓冲液中的有机溶剂浓度，并且以一定的梯度速率进行梯度洗脱。具体的梯度时间和斜率取决于样品类型、柱子类型、溶剂选择等多种因素。因此，何时换梯度应该根据实验结果和需要来确定。如果您对如何优化您的实验有疑问，请咨询相关专业人士或参考相关文献资料。