1、退火温度等于4乘(G加C)加2乘(A加T)减(5至8)只是粗算,有时不灵,但比较简便。2、用primer5(oroligo6)计算,引物配对好后,primer5可以显示Tm,我认为这个值就是退火温度,我的经验再加2or3度最好。