539.6公里。武汉位于中国腹地中心、湖北省东部，南京位于江苏省西南部、长江下游，两地相距539.6公里，驾车需行驶7小时18分钟。武汉市，湖北省辖地级市、省会，国务院批复确定的中国中部地区的中心城市，全国重要的工业基地。