调整细节。引物设计有3条基本原，需要考虑到诸多因素，如引物长度，产物长度，序列Tm值，引物与模板形成双链的内部稳定性(用ΔG值反映)，形成引物二聚体及发夹结构的能值，在错配位点的引发效率，引物及产物的GC含量，等等。必要时还需对引物进行修饰，如增加限制性内切酶位点，引进突变等。