生物素。丙酮酸羧化酶以共价键相结合，丙酮酸羧化酶是丙酮酸生成草酰乙酸的不可逆反应中的关键酶，是糖异生过程中的关键酶之一，因此丙酮酸羧化酶的辅助因子是生物素。